原位传代什么意思 原位是啥

原位传代什么意思?

应该叫做原位杂交技术

原位杂交技术(In situ hybridization,ISH)是分子生物学、组织化学及细胞学相结合而产生的一门新兴技术,始于20世纪60年代。

1969年美国耶鲁大学的Gall等(1969)首先用爪蟾核糖体基因探针与其卵母细胞杂交,将该基因进行定位,与此同时Buongiorno—Nardelli和Amaldi等(1970)相继利用同位素标记核酸探针进行了细胞或组织的基因定位,从而创造了原位杂交技术。

延伸阅读

原位核酸分子杂交技术简称原位杂交含义是什么?

通过组织化学或免疫组织化学方法在被检测的核酸原位形成带颜色的杂交信号,在显微镜或电子显微镜下进行细胞内定位。

原位杂交技术的优缺点?

原位杂交技术有以下几点优势:①安全、快速、灵敏度高;②探针能较长时间保存;③多色标记,简单直观;④可用于中期染色体及间期细胞的分析;⑤可应用于新鲜、冷冻或石蜡包埋标本以及穿刺物和脱落细胞等多种物质的检测。

原位杂交就是用核酸探针与基因组DNA或RNA进行碱基互补配对,在组织的原位标记目标DNA或RNA,核酸探针事先用同位素标记,因为标记物为同位素所以容易检测灵敏度高,但是同位素嘛你知道的,对人有害。

荧光原位杂交原理同上,但是标记物为荧光,对人无害,但是灵敏度不高。多彩荧光原位杂交技术也是一样,只不过采用了几种不同颜色的荧光素标记不同的探针,一次杂交可以检测多种目的基因。

因为荧光的灵敏度不如同位素高,为了提高灵敏度,就有了原位PCR。原位PCR的原理是,在基因组DNA或RNA的原位,进行PCR,使用的引物事先用荧光素标记,所以扩增出来的目的基因片段都带有荧光素,使得检测的灵敏度大幅提高。

谁知道原位杂交怎么做?

原位杂交是指将特定标记的已知顺序核酸为探针与细胞或组织切片中核酸进行杂交,从而对特定核酸顺序进行精确定量定位的过程。原位杂交可以在细胞标本或组织标本上进行。

另有荧光原位杂交。

中文名:原位杂交

外文名:in situ hybridization

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基本定义

原位杂交(in situ hybridization)

将标记的核酸探针与细胞或组织中的核酸进行杂交,称为原位杂交。

使用DNA或者RNA探针来检测与其互补的另一条链在细菌或其他真核细胞中的位置。

RNA原位核酸杂交又称RNA原位杂交组织化学或RNA原位杂交。该技术是指运用cRNA或寡核苷酸等探针检测细胞和组织内RNA表达的一种原位杂交技术。其基本原理是:在细胞或组织结构保持不变的条件下,用标记的已知的RNA核苷酸片段,按核酸杂交中碱基配对原则,与待测细胞或组织中相应的基因片段相结合(杂交),所形成的杂交体 (Hybrids)经显色反应后在光学显微镜或电子显微镜下观察其细胞内相应的mRNA、rRNA和tRNA分子。RNA原位杂交技术 经不断改进,其应用的领域已远超出DNA原位杂交技术。尤其在基因分析和诊断方面能作定性、定位和定量分析,已 成为最有效的分子病理学技术,同时在分析低丰度和罕见的mRNA表达方面已展示了分子生物学的一重要方向。

FISH是原位杂交技术大家族中的一员,因其所用探针被荧光物质标记(间接或直接)而得名,该方法在80年代末 被发明,现已从实验室逐步进入临床诊断领域。基本原理是荧光标记的核酸探针在变性后与已变性的靶核酸在退火 温度下复性;通过荧光显微镜观察荧光信号可在不改变被分析对象(即维持其原位)的前提下对靶核酸进行分析。DNA荧光标记探针是其中最常用的一类核酸探针。利用此探针可对组织、细胞或染色体中的DNA进行染色体及基因水平 的分析。荧光标记探针不对环境构成污染,灵敏度能得到保障,可进行多色观察分析,因而可同时使用多个探针,缩 短因单个探针分开使用导致的周期过程和技术障碍。

例子

以菌落原位杂交为例:

对分散在若干个琼脂平板上的少数菌落(100-200)进行克隆筛选时,可采用该方法。将这些菌落归并到一个琼脂主平板以及已置于第二个琼脂平板表面的一张硝酸纤维素滤膜上。经培养一段时间后,对菌落进行原位裂解。主平板应贮存于4℃直至得到筛选结果。

将少数菌落转移到硝酸纤维素滤膜上

(1) 在含有选择性抗生素的琼脂平板上放一张硝酸纤维素滤膜。

(2) 用无菌牙签将各个菌落先转移至滤膜上,再转移至含有选择性抗生素但未放滤膜的琼脂主平板上。应按一定的格子进行划线接种(或打点)。每菌落应分别划线于两个平板的相同位置上。最后,在滤膜和主平板上同时划一个含有非重组质粒(如pBR322)的菌落。

(3) 倒置平板,于37℃培养至划线的细菌菌落生长到0.5-1.0mm的宽度。

(4) 用已装防水黑色绘图墨水的注射器针头穿透滤膜直至琼脂,在3个以上的不对称位置作标记。在主平板大致相同的位置上也作上标记。

(5) 用Parafilm膜封好主平板,倒置贮放于4℃,直至获得杂交反应的结果。

(6) 裂解细菌,按本段下面所述方法,使释放的DNA结合于硝酸纤维素滤膜。

菌落的裂解及DNA结合于硝酸纤维素滤膜

(1) 在一张保鲜膜上制作一个装有0.5mol/L NaOH的小洼(0.75ml),使菌落面朝上,将滤膜放到小洼上,展平保鲜膜,使滤膜均匀湿润,让滤膜留于原处2-3分钟。

(2) 用干纸巾从滤膜的下方吸干滤膜,用一张新的保鲜膜和新配制的0.5mol/L NaOH重复步骤(1)。

(3) 吸干滤膜,将滤膜转移到新的带有1mol/L Tris·Cl(pH7.4)的保鲜膜洼上。5分钟后吸干滤膜,再重复一次该步骤。

(4) 吸干滤膜,把它转移到有1.5mol/L NaCl、0.5mol/L Tris·Cl (pH7.4)的保鲜膜小洼上5分钟后吸干滤膜,转移到一张干的滤纸上,置于室温20-30分钟,使滤膜干燥。

(5) 将滤膜夹在两张干的滤纸之间,在真空烤箱中于80℃干烤2小时,固定DNA。

(6) 将固定在膜上的DNA与32 P标记的RNA进行杂交。

3.杂交 (1) 盛有2×SSC的塑料盘同,将干烤的滤膜飘浮在液面上,彻底浸湿5分钟。

(2) 将滤膜转到200ml预洗液的玻璃皿中。滤膜何叠在一起,放于溶液中。用保鲜膜盖住玻璃皿,放到位于培养箱内的旋转平台上。于50℃处理30分钟。在这一步及以后的所有步骤中,应缓缓摇动滤膜,防止它们粘在一起。

(3) 用泡过预洗液的吸水棉纸轻轻地从膜表面拭去细菌碎片,以降低杂交背景而不影响阳性杂交信号的强度和清晰度。

(4) 将滤膜转到盛有150ml预杂交液的玻璃中,在适宜温度(即在水溶液中杂交时用6

原仁杂交技术是什么意思?

原位杂交是一种技术方法,临床上用途很广,可用于检测多种疾病,例如各种癌变、感染性疾病、遗传代谢性疾病等。原理是人为设计出一些特定序列的核酸分子,做成探针,与待检测的细胞核酸共同孵育,从而达到诊断疾病的目的。

例如癌细胞的核酸是有一些异常片段的,根据这些异常片段做出互补的片段(加入放射性同位素做标志物),经诊断技术显示出来,从而进行分子水平的诊断。

原位核酸分子杂交技术简称原位杂交(in situ hybridization,ISH)含义是什么?

原位核酸分子杂交技术简称原位杂交(insituhybridization

ISH)是应用已知碱基顺序并带有标记物的核酸探针与组织、细胞中待检测的核酸按碱基配对的原则进行特异性结合而形成杂交体,然后再应用与标记物相应的检测系统,通过组织化学或免疫组织化学方法在被检测的核酸原位形成带颜色的杂交信号,在显微镜或电子显微镜下进行细胞内定位。这一技术为研究单一细胞中DNA和编码各种蛋白质、多肽的相应mRNA的定位提供了手段,使从分子水平研究细胞内基因表达及有关基因调控提供了有效的工具。可视为组织化学或免疫细胞化学中革命性的突破。原位杂交技术已应用于基础研究如基因组图(Gene

mapping),转基因检测,基因表达定位(localizationofgene

expression),核DNA和RNA的mRNA的排列和运输(arrangementandtransportof

mNA),复制(replication)和细胞的分类(Sortingof

cells)。临床研究应用在细胞遗传学(Cytogenetics),产前诊断(Prenatal

diagnosis),肿瘤和传染性疾病的诊断,生物学剂量测定(biological

dosimetry)和病毒学的病原学诊断等。随着核酸探针的制备,标记方法和基本操作方法的不断改进,新的技术不断涌现,相信在不久的将来,原位杂交技术将会更广泛的被应用于各个学科,并不断为生命科学提供新的资料,开拓新的领域。

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详细资料请参考:on

原位杂交技术是什么?

原位杂交技术的基本原理是利用核酸分子单链之间有互补的碱基序列,将有放射性或非放射性的外源核酸(即探针)与组织、细胞或染色体上待测DNA或RNA互补配对,结合成专一的核酸杂交分子,经一定的检测手段将待测核酸在组织、细胞或染色体上的位置显示出来。

免疫细胞化学是用标记的特异性抗体(或抗原)对组织内抗原(或抗体)的分布进行组织和细胞原位检测技术。

一个是用核酸序列检测,一个使用抗体或抗原检测

它们都可以定位

怎样简单的介绍原位杂交的概念?

原位杂交原位杂交(InSituHybridization,ISH)是用标记的核酸探针,使用非放射检测系统或放射自显影系统,在组织切片、细胞涂片及染色体制片上等对核酸进行定性、定位和相对定量研究的一种分子生物学方法,具有灵敏、特异、直观等优点

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